Staphylococcus hemolyticus is een grampositieve coagulase-negatieve bacterie die veel gebruikelijk is in ziekenhuizen. In de afgelopen jaren hebben in het ziekenhuis verworven infecties steeds meer aandacht gekregen vanwege hun hogere risico. Staphylococcus hemolyticus kan huidinfecties, meningitis, peritonitis en zelfs sepsis verder veroorzaken. Vertragingen in de klinische diagnose kunnen leiden tot verslechterende gezondheidstoestand, dus snelle diagnose van S. hemolyticus is de sleutel tot een nauwkeurige behandeling.
Het onderzoeksteam van leraar Ji Tuo van de Central Laboratory Department van het Second People's Hospital van Lianyungang, China publiceerde een artikel "Een snelle en visuele detectie van Staphylococcus hemolyticus in klinische specimens met MiRA-LF's" in het tijdschrift "Analytica Chimica Acta", met een impactfactor van 6,2.
1. Overzicht van het onderzoek
In deze studie werd een MIRA-LFS-methode gebaseerd op het MVAA-gen opgericht om Staphylococcus hemolyticus te detecteren. Het multi-enzym isotherme snelle nucleïnezuuramplificatietechnologie MiRA werd gecombineerd met laterale stroomteststrip LF's om snelle pathogene detectie te bereiken.
Het experiment werd uitgevoerd op 37 graden en de resultaten konden binnen 9 minuten worden gedetecteerd. De detectiegevoeligheid was 0. 147cfu/reactie.
De MIRA-LFS-detectiemethode is geschikt voor de vaste-puntdetectie van Staphylococcus-hemolyticus in klinische monsters, waardoor de POCT-methode wordt gerealiseerd voor het identificeren van Staphylococcus-hemolyticus, die van grote waarde is voor snelle diagnose en behandeling van snelle ziekten en behandeling in gebieden met niet-ervaren medische diensten.
Het onderzoeksteam gebruikte MiRA-LF's, QPCR en traditionele bacteriële cultuurmethoden om 95 willekeurige klinische monsters te analyseren en bevestigde de klinische toepasbaarheid.
2. Onderzoeksmethoden
Het schematische diagram van MiRA-LFS-detectie is hierboven weergegeven.
Het onderzoek gebruikte AMP-Future Biotech's DNA-isotherme snelle amplificatiekit (colloïdaal goudteststrooktype) en teststrips van nucleïnezuurdetectie.
De MVAA -genprimerlengte is 30-35 nucleotiden, en de productlengte van de amplificatie is 100-350 bp. In totaal werden 6 paar kandidaat -primers ontworpen. MiRA -analyse werd uitgevoerd met behulp van GDNA van standaard Staphylococcus -hemolyticusstammen, kandidaat -primers werden gescreend en amplificatieproducten werden weergegeven met behulp van 2% agarosegelelektroforese.
Ontwerp vervolgens de sonde op basis van de voorwaartse primersequentie (zich uitstrekt van 16 bp achteruit). Het 5 'uiteinde van de sonde werd gelabeld met FITC en het uiteinde van 3' werd gelabeld met C3 -blokkering. Gebruik THF om de 31 nucleotide in de sonde te vervangen. THF is 30 bp vanaf het 5 'uiteinde en 15 bp vanaf het einde van 3'. Het 5 'uiteinde van de geselecteerde reverse primer is gelabeld met biotine.
Bovendien heeft het onderzoeksteam de reactieomstandigheden voor MiRA-LFS-detectie van Staphylococcus hemolyticus geoptimaliseerd. Test op 37 graden met tussenpozen van 2 minuten van 4 tot 12 minuten. De resultaten worden weergegeven na 8 minuten reactietijd en de testlijn is duidelijk zichtbaar. Bovendien worden tests uitgevoerd met intervallen van 5 graden van 22-52 graad. 37-42 graad is de meest geschikte temperatuur voor MiRA-LFS-detectie. Daarom zijn de optimale reactietijd en temperatuur van de MIRA-LFS-methode voor Staphylococcus hemolyticus respectievelijk 8 minuten en 37 graden. Samen met het eindresultaat dat binnen 1 minuut door LF's wordt gevisualiseerd, is de totale detectietijd 9 minuten.
3. Experimentele resultaten
Gevoeligheidsverificatie
MiRA-LFS-test werd uitgevoerd op verschillende concentraties genomisch DNA (gDNA) verkregen uit serieel verdunde Staphylococcus hemolyticus culturen (1 0^6-10^0 cfu/ml).
Probabilistische eenheidsregressieanalyse toonde aan dat de 95% LOD bepaald door de MiRA-LFS-test 0. 147 CFU/reactie was.
Specificiteitsverificatie
Door 18 gemeenschappelijke pathogene microbiële stammen en 15 klinische Staphylococcus hemolyticusstammen te analyseren, werd de selectiviteit van MiRA-LFS-detectie van Staphylococcus hemolyticus bepaald. De resultaten toonden aan dat de MiRA-LFS-test negatief was voor 18 andere pathogene bacteriën en positief voor 15 geverifieerde klinische monsters van Staphylococcus hemolyticus.
MiRA-LFS-detectie is zeer selectief en geschikt voor screening van Staphylococcus hemolyticus.
Werkelijke monstertests
Lianyungang Second People's Hospital verzamelde willekeurig 95 exemplaren, waaronder 35 huid- en zacht weefselmonsters, 16 urinemonsters, 14 sputummonsters en 30 bloedmonsters.
De resultaten toonden aan dat de detectiemethode 100% consistent was met de qPCR -methode. Bovendien waren vergeleken met de gouden standaard (GB/T4789. 11-2003) de gevoeligheid en specificiteit van de MiRA-LFS-detectiemethode voor het identificeren van Staphylococcus hemolyticus-infectie respectievelijk 100% en 98,73%. Deze resultaten hebben verder de technische haalbaarheid van deze methode geverifieerd bij het detecteren van Staphylococcus -hemolyticus in klinische monsters.
De MIRA-LFS-methode wordt gebruikt voor snelle POCT-detectie van Staphylococcus hemolyticus. Het is efficiënt, nauwkeurig, eenvoudig en goedkoop en helpt om snelle diagnose en behandelingsbeslissingen te nemen.
Meer informatie over Mira Technology
Het multi-enzym-isotherme isotherme nucleïnezuuramplificatietechnologie van AMP-Future versterkt nucleïnezuren bij een constante temperatuur van 39 graden -42 graad, met een reactietijd van slechts 5-20 minuten. Bovendien zijn strikte laboratoriumomstandigheden niet vereist en zijn de aanvraagscenario's gediversifieerd: algemene laboratoriumafdelingen van het ziekenhuis, eerstelijnszorg, huizentests, velden, enz.
Reagent-productvormen zijn divers: gevriesdroogd poeder, gevriesdroogde microsferen, enz.; Displayresultaten zijn divers: gelelektroforese, fluorescentiecurve, colloïdale gouden teststrips, enz. Het reagens heeft stabiele prestaties, is gemakkelijk te bedienen en is handig voor opslag en transport.
Met MiRA als de kernplatformtechnologie heeft het een reeks ondersteunende producten ontwikkeld zoals "ultrasnelle nucleïnezuurafgifte-technologie", "dual-channel isothermische fluorescentiedetector", "geïntegreerd volledig automatisch gesloten detectiesysteem", "zelftesting nucleïnezuurdetectieapparaat", enz. Creëer een algemene oplossing voor snelle moleculaire detectie.